TÉCNICAS Y MÉTODOS DE TINCION 
La tinción es un método sencillo para incrementar el contraste entre la célula y
su entorno y por lo tanto contribuye a mejorar la imagen observada. Las técnicas de
tinción con diversos colorantes facilitan la observación al aumentar notablemente el
contraste.
En Microbiología todas las tinciones se realizan a partir de suspensiones de
microorganismos extendidas en un portaobjetos (frotis), secadas y fijadas. La fijación,

procedimiento que permite preservar estructuras celulares, se puede llevar a cabo condiferentes tratamientos: fijación por calor o fijación química. La fijación por calor es la
más utilizada para la observación de bacterias. Este procedimiento consiste en pasar el
portaobjetos, con la suspensión bacteriana extendida y seca, a través de una llama de
un mechero. La fijación por calor preserva la morfología externa de los
microorganismos pero no las estructuras internas. La fijación química con agentes
como etanol, folmaldehido y ácido acético entre otros muchos, se utiliza para
preservar las estructuras celulares.
Se pueden utilizar dos tipos de procedimientos, la tinción positiva es la más
frecuente, en ella un colorante se une a ciertas estructuras microbianas. Todos los
colorantes utilizados en microbiología tienen en común la presencia de grupos
cromóforos, grupos con dobles enlaces conjugados que son los responsables del color
mediante la unión a estructuras celulares por enlaces iónicos, covalentes o hidrófobos,
los que establecen enlaces iónicos son los más frecuentes. Entre los colorantes que se
unen por enlaces covalentes destaca el reactivo de Schiff, utilizado para la tinción de
DNA, donde el colorante se une a la desoxi-ribosa.
Por otra parte, en la tinción negativa se utilizan compuestos que no penetran en
las células sino que impregnan el medio circundante. Los microorganismos aparecen
refringentes sobre un fondo negro.
Método de la gota pendiente
Este procedimiento es la forma más sencilla de observación de organismos
vivos, nos proporciona información sobre la morfología, tamaño, color y movilidad de
las bacterias. Sin embargo, debido a la falta de contraste con el entorno es una
práctica que se utiliza únicamente para la observación del movimiento.


Tinción negativa
No se trata de una tinción propiamente dicha ya que no se utilizan colorantes
con cromóforos, ni se lleva a cabo ninguna reacción entre estructuras celulares y los
colorantes. En este caso el frotis se hace con una gota de una solución de nigrosina o
tinta china, ambos son productos particulados, insolubles, que formarán una película
opaca a la luz. En este tipo de tinción se prescinde de la fijación por calor, se deja secar
la preparación y se observan los microorganismos brillantes sobre un fondo oscuro

Tinción simple
La mayoría de los colorantes utilizados en las tinciones positivas son colorantes
derivados de las anilinas, sales orgánicas intensamente pigmentadas que proceden del
alquitrán.
Se denominan colorantes básicos si el cromóforo (porción coloreada) de la
molécula está cargada positivamente, por ejemplo, cristal violeta (Fig. 5) y azul de
metileno son colorantes básicos. Otros colorantes de esta categoría utilizados con
frecuencia en bacteriología son safranina, fuchina básica y verde malaquita. Bajo
condiciones normales de crecimiento, la mayor parte de los procariotas tienen un pH
interno próximo a la neutralidad (pH 7.0) y una superficie celular cargada
negativamente, así los colorantes básicos son los más eficaces. Colorantes ácidos con
rojo Congo, rosa de bengala, eosina y fuchina ácida tiene un cromóforo cargado
negativamente y son utilizados para teñir positivamente ciertos componentes como
las proteínas.

Tinción de Gram
Esta tinción diferencial fué propuesta por el medico danés Christian Gram (1884)
(TORTORA et al., 2007) que examinando tejido pulmonar de enfermos fallecidos por
neumonía observó que la bacteria Streptococcus pneumoniae, presente en los
pulmones, retenía el colorante conocido como marrón Bismark (sustituido
posteriormente por el cristal violeta), mientras que el tejido pulmonar no era capaz de
retener el colorante.
Es la tinción diferencial más utilizada de forma rutinaria y prácticamente la
primera prueba a la que se someten las muestras de cualquier origen antes de su
estudio. Proporciona una información esencial, además de sobre la forma, tamaño y agrupación celular, como es el tipo y composición de la pared que presentan las
bacterias. La tinción de Gram divide a las bacterias con pared del Dominio Bacteria en
dos grandes grupos: bacterias con pared de tipo gram positiva y bacterias con pared de
tipo gram negativa.

Tinción de cápsulas

La cápsula es una estructura que rodea externamente la pared de algunos 

microorganismos y constituye una barrera física que protege a la célula del ambiente 

externo, proporcionando numerosas ventajas a los microorganismos que son capaces 

de sintetizarla, por ejemplo, en las bacterias patógenas la cápsula permite la adhesión 

al hospedador o protege de la fagocitosis, en otros casos incrementa las posibilidades 

de sobrevivir en condiciones de desecación en bacterias que colonizan ambientes 

naturales, o bien previenen el ataque de algunos virus, en otras ocasiones son 

importantes factores de virulencia en algunas especies clínicamente relevantes como 

es el caso de Streptococcus pneumoniae y también proporcionan importantes ventajas 

al facilitar la adhesión a superficies sólidas. El procedimiento para la realización de la 

tinción de cápsulas es el mismo que se ha explicado para la tinción negativa. Las 

cápsulas aparecen rodeando a las células como estructuras sin teñir sobre un fondo 

oscuro

Tinción de esporas

Esta tinción permite poner de manifiesto la endospora bacteriana, una forma de 

resistencia producida por algunos géneros de bacterias gram positivas. Las endosporas 

aseguran la supervivencia de estas bacterias en condiciones desfavorables (altas 

temperaturas, desecación, radiaciones ultravioletas, gamma y agentes químicos), 

durante largos periodos de tiempo.